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分享!液相色谱柱的再生和再生原则

发布时间:2022-11-28   点击次数:75次
  液相色谱柱基于熔融核技术,其性能超越传统全孔5μm和3μm色谱柱,在不增加柱压的情况下,实现快速高效分离,可作为传统5μm色谱柱的新型标准柱。目前,液相色谱柱适用范围广,从极性化合物到非极性化合物都可获得良好的分离,在碳水化合物如低聚糖、苷类糖化学,生药学和天然产物化学,生物物质如多肽、蛋白、核酸等多个领域发挥重要作用。
 
  液相色谱柱再生:
  当液相色谱柱柱压正常,但色谱图异常时,首先更换保护柱重新进样观察色谱图,若仍然异常则判断为液相色谱柱柱效下降,需要进行再生步骤。柱效下降在色谱图上主要表现为6种,分别为峰形加宽变形、峰形变粗、严重拖尾、出现肩峰、峰尖分叉(双峰)及峰形畸变。这些异常往往导致无法准确定量,对数据的准确性造成影响。
 
  一般而言,前3种情形受到污染的情况比较轻微,经过再生即可大大提高柱效。出现第4种峰形一般是由于液相色谱柱受污染较为严重,如果是发生在初期,通过再生清洗也能够恢复大部分柱效,如果长时间未进行处理,污染物与固定相已经牢固结合,则不能通过再生进行恢复,而只能通过清除被污染的固定相来进行修复了。出现第5种峰形一般是液相色谱柱柱头塌陷所致。第6种情形是本应为单一的色谱峰却畸变为多个色谱峰,这是污染非常严重造成的。柱头塌陷和严重污染均不能通过再生恢复柱效,只能通过物理方法进行修复。
 
  再生原则如下:
  1、反相柱的再生:采用甲醇:水=95:5(V:V),纯甲醇、二氯甲烷等溶剂作流动相,顺次冲洗,每种流动相经液相色谱柱的量为20~30倍柱体积,然后再用相反顺序冲洗液相色谱柱。
  2、正相柱的再生:顺次用20~30倍柱体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷﹑甲醇作为流动相冲洗液相色谱柱,然后再以相反的顺序冲洗液相色谱柱。由于异丙醇的黏度较大,冲洗时应将流速调到0.2mL/min,以免柱压过大冲坏液相色谱柱。
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